Revista de técnicas inmunológicas y enfermedades infecciosas

Inmunoensayo de microesferas de fluorescencia para la detección de anticuerpos contra el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino y el circovirus porcino tipo 2 utilizando proteína A, proteína G y proteína A/G

Mohammad M Hossain y Raymond RR Rowland

El objetivo de este estudio fue el desarrollo de un inmunoensayo de microesferas de fluorescencia multiplex (FMIA) para la detección de anticuerpos IgG específicos del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) y del circovirus porcino tipo 2 (PCV2) mediante la incorporación de conjugados no específicos de la especie de proteína A, G y A/G en lugar del anticuerpo secundario. Se analizaron un total de 205 muestras de suero obtenidas de cerdos infectados experimentalmente con PRRSV y/o PCV2. Para la producción de antígenos recombinantes, la nucleoproteína (N) de PRRSV y la proteína de la cápside (CP) de PCV2 se expresaron en Escherichia coli y se purificaron en una columna de afinidad de níquel. Las proteínas purificadas se acoplaron covalentemente a microesferas carboxiladas. Se ensamblaron cuatro antígenos objetivo en un único multiplex y se analizaron contra sueros de cerdos infectados o coinfectados con PRRSV o PCV2. Se analizaron las proteínas A, G y A/G en lugar del conjugado secundario de IgG porcina. Todos los conjugados fueron capaces de detectar anticuerpos y la detección de respuestas de IgG contra antígenos de PRRSV y PCV2 varió con A > A/G > G. En ausencia de reactivos específicos de la especie, la incorporación de proteínas A, G y A/G proporciona sustitutos adecuados.