Revista de técnicas inmunológicas y enfermedades infecciosas

Optimización del ensayo de flujo lateral para la detección del morbilivirus canino y aplicación de la tira como sustituto de la muestra

Monu Karki*, KK Rajak, Praveen Singh, Arfa Fayaz, Kiran, Mukesh Bhatt, Vishal Rai, Chris Einstein, Ajay Kumar Yadav y RP Singh

El moquillo canino es una enfermedad emergente, causada por el morbillivirus canino (CDV) de la familia Paramyxoviridae. El virus ha evolucionado como un patógeno multihuésped, ya que afecta a muchas especies de animales salvajes. El desarrollo de pruebas de diagnóstico específicas y sensibles es la necesidad de un programa de control. Hay varias pruebas de diagnóstico disponibles para la detección de antígenos y anticuerpos de CDV. El ensayo de flujo lateral (LFA) es la prueba de diagnóstico en el punto de atención más prometedora debido a su especificidad, fácil uso y resultado instantáneo. Este estudio fue diseñado para desarrollar un ensayo de flujo lateral utilizando el anticuerpo monoclonal (mAb) desarrollado internamente contra la proteína de la nucleocápside (N) del aislado 'CDV/dog/bly/Ind/2018', que representa las cepas circulantes de la India. Los dos mAb incluidos en el estudio mostraron una alta afinidad de unión en el ensayo ELISA indirecto y el ensayo de transferencia de puntos. De los dos, se seleccionó un mAb debido a su afinidad de unión comparativamente mayor en formato LFA y a su menor unión no específica a la matriz biológica y a los componentes del tampón. Las muestras clínicas frescas recogidas en el lugar se detectaron claramente mediante el LFA, mientras que las muestras almacenadas con un título reducido del virus mostraron resultados inconsistentes. Además, las muestras de sangre mostraron una distinción clara entre positivo y negativo en comparación con los homogeneizados de hisopos y tejidos. La extracción de ARN de la tira fue exitosa con algunas modificaciones en el método de extracción de ARN Trizol y se amplificaron los fragmentos de los genes N y H. Por lo tanto, el estudio concluye que el LFA es adecuado para la detección de antígenos de CDV en condiciones de campo y las tiras se pueden utilizar como sustituto de la muestra para el estudio molecular.