Revista de nanomateriales y nanotecnología molecular

Preparación de anticuerpo anti-elastasa conjugado con puntos cuánticos de 710 nm e isotiocianato de fluoresceína para inmunoensayo de células somáticas de la leche

Zlatina Becheva y Tzonka Godjevargova

Preparación de anticuerpo anti-elastasa conjugado con puntos cuánticos de 710 nm e isotiocianato de fluoresceína para inmunoensayo de células somáticas de la leche

Se desarrolló un nuevo método microscópico de inmunofluorescencia para el recuento de neutrófilos y células somáticas utilizando un anticuerpo anti-elastasa. Se prepararon dos conjugados diferentes: anticuerpo anti-elastasa de neutrófilos bovinos-isotiocianato de fluoresceína y conjugado anticuerpo anti-elastasa de neutrófilos bovinos-Quantum Dots 710nm. El acoplamiento de Quantum Dots (QDs) e isotiocianato de fluoresceína (FITC) al anticuerpo se ha demostrado mediante la comparación de los espectros de absorción ultravioleta y los espectros de fluorescencia del conjugado y los componentes iniciales. Las actividades de los conjugados se midieron mediante ELISA indirecto en las mismas condiciones. Se encontró que la sensibilidad del inmunoensayo con conjugado QDs era mayor que la sensibilidad del inmunoensayo con conjugado FITC. Se estudió la estabilidad de almacenamiento del conjugado anticuerpo anti-elastasa de neutrófilos bovinos-QDs710nm y del conjugado anticuerpo anti-elastasa de neutrófilos bovinos-FITC. La intensidad de fluorescencia residual de los QDs con anticuerpo anti-elastasa fue del 95% al ​​día 30, mientras que la intensidad del conjugado de anticuerpo anti-elastasa-FITC se redujo al 60% el mismo día. Los conjugados obtenidos se aplicaron en una prueba real con células somáticas de leche bovina. La obtención de imágenes de fluorescencia demostró que el conjugado de QDs tiene una mejor intensidad de fluorescencia que el conjugado de FITC y es más apropiado para la determinación de células somáticas en la leche.