Revista de técnicas inmunológicas y enfermedades infecciosas

Establecimiento de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa fluorescente en tiempo real (PCR) para la detección del subtipo H5N1 del virus de la influenza aviar altamente patógeno

Miao-lian Tan, Yuan-yuan Niu, Wei Shui, Jiancong Lin, Ming Li y Changran Zhang

Las cepas altamente patógenas del virus de la influenza aviar (AIV), que son los virus de la influenza A, causan enfermedades graves en las aves de corral domésticas y en los seres humanos. El objetivo de este estudio fue establecer un ensayo de RT-PCR cuantitativa fluorescente para la detección del subtipo H5N1 del virus de la influenza aviar (AIV) altamente patógeno. Los conjuntos de sondas específicas de los subtipos H5 y N1 se desarrollaron con base en secuencias del virus de la influenza aviar detectadas en China. Se diseñaron y optimizaron estrictamente dos pares de cebadores y dos sondas fluorescentes en un sistema de reacción. De acuerdo con la cantidad de ARN plasmídico extraído de las cepas H5N1, se dibujó la curva estándar DWQBGWDWQBGW de PCR cuantitativa fluorescente y luego se analizaron todas las muestras mediante PCR en tiempo real. La prueba del subtipo H5N1 del AIV altamente patógeno se identificó como específica y su nivel de sensibilidad fue de 102~103 copias/reacción. La curva estándar se realizó a 109～105 copias de ADN/reacción. Desde la extracción del ARN viral hasta la finalización de la prueba, transcurrieron tan solo tres horas. El ensayo fue fácil de realizar y altamente reproducible. En conclusión, la PCR cuantitativa fluorescente, descrita aquí, proporciona un método rápido, específico y sensible para detectar no solo los genes H5 sino también los N1.