Revista internacional de investigación cardiovascular

Uso de Na3PO4 para mejorar los modelos animales in vitro de calcificación de la válvula aórtica

Daniel Alejandro Lerman, Sai Prasad y Nasri Alotti

Uso de Na3PO4 para mejorar los modelos animales in vitro de calcificación de la válvula aórtica

Antecedentes/Objetivos: La patogenia de la enfermedad valvular aórtica calcificada (EVAC) implica un proceso inflamatorio activo de las células intersticiales valvulares (CIV) caracterizado por la activación de vías de señalización osteogénica específicas y apoptosis. Este proceso puede estudiarse mediante el análisis de ciertos marcadores moleculares y vías de expresión génica de la calcificación espontánea. El propósito de nuestro estudio es investigar el papel del fosfato de sodio (Na 3 PO 4 ) como promotor de la calcificación, con el objetivo de mejorar los modelos animales in vitro para probar posibles inhibidores de la calcificación.

Materiales y métodos: Se extrajeron las células calcificadas de 6 corazones porcinos frescos sanos de 6 meses de edad mediante digestión seriada con colagenasa. Se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para cuantificar la transdiferenciación de genes de interés durante la calcificación espontánea de las células calcificadas de los corazones. La calcificación espontánea de las células calcificadas de los corazones se incrementó añadiendo Na3PO4 ( 3 mM , pH 7,4). El grado de calcificación se estimó mediante tinción con rojo de alizarina para la deposición de calcio y tinción con rojo sirio para el colágeno. Se utilizaron técnicas colorimétricas para determinar cuantitativamente la deposición de calcio y colágeno. Además, se midió la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina (ALP) mediante un ensayo cinético. Para el análisis estadístico utilizamos SPSS y Microsoft Office Excel 2013.

Resultados: Las células VIC porcinas se calcifican espontáneamente con un depósito demostrable de calcio y colágeno. En este estudio, observamos un aumento del depósito de calcio y colágeno desde el día 0 hasta el día 14 (calcio: 376%; P<0,001, colágeno: 3553%; P<0,001). El análisis de qPCR del ARNm el día 14 mostró los siguientes resultados: la α-actina, un marcador del fenotipo de mioblastos, aumentó a 1,6 veces; P<0,001. Runx2, un marcador de osteoblastos, aumentó a 1,3 veces; P<0,05, TGF-β, un promotor de la osteogénesis, aumentó a 3,2 veces; P<0,001, y RhoA, un regulador de la formación nodular en mioblastos, aumentó a 4,5 veces; P<0,001, en comparación con sus niveles en el día 0. El ARNm de RANKL y la calponina no cambiaron significativamente. El tratamiento de las células de calcio víricas porcinas con Na3PO4 ( 3 mM , pH 7,4) produjo un marcado aumento de la deposición de calcio el día 14 (522%; P<0,001) y un aumento significativo de la actividad de la fosfatasa alcalina el día 7 (228%; P<0,05). No hubo cambios significativos en la actividad de la fosfatasa alcalina entre los grupos el día 14.

Conclusión: Este estudio ha demostrado la regulación positiva de algunas moléculas específicas durante la calcificación espontánea de las VIC aórticas con un aumento activo de la actividad de calcio, colágeno y fosfatasa alcalina. En este modelo in vitro fue posible aumentar la calcificación espontánea de las VIC con Na3PO4 ( 3 mM , pH 7,4) hasta un nivel en el que se podrían probar inhibidores de la calcificación para identificar una nueva estrategia terapéutica potencial contra la estenosis aórtica calcificada.

Descargo de responsabilidad: este resumen se tradujo utilizando herramientas de inteligencia artificial y aún no ha sido revisado ni verificado.