Revista de ciencia veterinaria y diagnóstico médico

Aplicación de antígenos recombinantes marcados con histidina en el diagnóstico de infecciones virales

Mohammad M Hossain y Raymond R Rowland

Las proteínas marcadas con histidina se detectan frecuentemente con anticuerposLas proteínas marcadas con histidina se detectan frecuentemente con anticuerpos específicos para la etiqueta de histidina; estos son útiles en estudios inmunológicos. Se utilizó un anticuerpo monoclonal penta-His (mAb) para estimar la cantidad relativa de proteína recombinante unida a cada conjunto de microesferas en un inmunoensayo de microesferas fluorescentes (FMIA). En este estudio, se probó el uso del mAb anti-His para la detección de antígenos recombinantes de siete virus animales diferentes: virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV), circovirus porcino tipo 2 (PCV2), virus de la influenza porcina (SIV), virus de la peste porcina africana (ASFV), virus de la peste porcina clásica (CSFV), virus de la diarrea viral bovina (BVDV) y virus de la fiebre del Valle del Rift (RVFV) unidos a microesferas después del acoplamiento. Las proteínas se produjeron como proteína de fusión 6xHis-ubiquitina y se acoplaron covalentemente a microesferas de poliestireno Luminex MagPlex® carboxiladas. Los antígenos diana se ensamblaron en un único multiplex y se probaron en presencia de mAb anti-His-tag. Los resultados se informaron como intensidad de fluorescencia media (MFI). La interacción entre antígenos recombinantes marcados con His y mAb anti-His-tag se probó utilizando péptido bloqueador de His-tag. Los resultados del ensayo de bloqueo de His-tag mostraron que 1 μg/ml de péptido bloqueador de His-tag puede inhibir completamente la interacción de antígenos marcados con His y anti-HismAb. Los valores de MFI para las muestras de suero negativas mostraron una reducción de 10 a 40 veces en comparación con sueros positivos para PRRSV-N, PCV2, SIV, ASFV, CSFV y BVDV. Por lo tanto, el uso del mAb anti-His proporciona un medio conveniente para evaluar la unión de antígenos a las microesferas.