Revista de ciencia veterinaria y diagnóstico médico

Desarrollo de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas basado en proteína nucleocápside recombinante para la detección serológica de la enfermedad de disentería invernal

Kanokwan Singasa, Taweesak Songserm, Preeda Lertwatcharasarakul, Siriluk Jala, Sakuna Phattanakunanan y Pipat Arunvipas

La disentería invernal es una enfermedad viral aguda y contagiosa que afecta negativamente al ganado lechero en las granjas de Tailandia. Se produjo un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas indirecto (ELISA) basado en la proteína nucleocápside recombinante (rN) que se ha desarrollado para la detección de anticuerpos contra la disentería invernal mediante un sistema de expresión de proteínas de Escherichia coli. La proteína del antígeno del epítopo N se diseñó utilizando fragmentos casi totales del gen N (8-430 aa, gen N). Se identificó que tenía aproximadamente 48 kDa como la proteína rN y puede unirse al suero de ganado lechero positivo al coronavirus bovino mediante análisis de transferencia Western. Se optimizaron las condiciones del método ELISA. La proteína rN se estandarizó con una concentración de antígeno de recubrimiento de 5 μg/pocillo. La proteína rN se analizó con sueros tanto de ganado lechero infectado como no infectado. La dilución de los anticuerpos primarios se identificó como 1:50 utilizando una titulación de tablero de ajedrez. Los ensayos intra e inter fueron repetibles. El valor de corte del valor de OD450 corregido de la media ± 2 DE (desviaciones estándar) se estableció en 0,049. El porcentaje de especificidad, sensibilidad y precisión entre el rNELISA desarrollado y un kit ELISA SVANOVIR® BCV-Ab fue de 96,3, 84,8 y 86,1 %, respectivamente. El valor kappa de Cohen del ELISA desarrollado en comparación con el kit de prueba comercial fue de 0,71. El coeficiente de correlación de los valores de absorbancia de estas dos pruebas fue de 0,68. El método ELISA de proteína de nucleocápside recombinante podría ser útil para el diagnóstico y la vigilancia del coronavirus bovino.