Revista de ciencia veterinaria y diagnóstico médico

Investigación de cepas del virus de la bronquitis infecciosa mediante RT-PCR en tiempo real y secuenciación del gen S1 en pollos de engorde

Engin Alp Onen y Yakut Ozgur

En este estudio, se apuntó a la detección del virus de la bronquitis infecciosa (IBV) a partir de muestras de hisopado traqueal de pollo mediante RT-PCR en tiempo real, que se informó como un método de detección de virus rápido y sensible. Se determinaron las relaciones filogenéticas en diferentes cepas de campo y variantes de IBV mediante la secuenciación de regiones hipervariables (HVR) del gen S1 de IBV. Se tomaron hisopados traqueales de 120 pollos de engorde con signos respiratorios, al azar. Las muestras se inocularon en los líquidos alantoideos (AF) de huevos de pollo embrionados SPF. Los ARN se extrajeron mediante AF. Los ARN se tradujeron a ADNc ss. La RT-PCR en tiempo real se realizó con sonda Taqman doblemente marcada, pares de cebadores IBV 5 GU391 y IBV5 GL533. Se obtuvieron resultados positivos en 33 muestras de 120 (27,5 %) mediante RT-PCR en tiempo real. Los ADNc de las muestras positivas se utilizaron para la amplificación de las regiones hipervariables (HVR) en la región del gen S1 con los iniciadores C2U y Ag0723. Las muestras también se amplificaron con los iniciadores S1 5'mod y CK2. Los productos de RT-PCR se secuenciaron directamente. Los resultados de la secuenciación se compararon con la base de datos de nucleótidos del NCBI. Los resultados de la secuenciación coincidieron con algunas cepas variantes del virus de la bronquitis infecciosa en la base de datos de bancos de genes a una tasa del 72-86 %. Estos resultados respaldan que nos enfrentamos a cepas variantes del virus de la bronquitis infecciosa. Además, observamos muchas mutaciones de SNP en alineación. Este estudio muestra que las aves pueden infectarse con cepas variantes del virus de la bronquitis infecciosa a una tasa del 27,5 %, aunque hayan sido vacunadas con la vacuna de tipo clásico. Estos resultados demuestran que la vacunación con cepas de la vacuna clásica del virus de la bronquitis infecciosa no puede proporcionar suficiente protección cruzada contra las cepas variantes. Por lo tanto, los brotes de la enfermedad todavía ocurren en las bandadas vacunadas. Además, encontramos que estos iniciadores no son suficientes para secuenciar y clasificar todas las cepas de campo del virus de la bronquitis infecciosa. Por lo tanto, se deben desarrollar diferentes cebadores y utilizar más de dos pares de cebadores. En este experimento, descubrimos que la carga viral es mayor en las muestras de AF que en las de hisopado debido a la replicación del virus de la bronquitis infecciosa en las muestras de AF de huevos SPF. Observamos enanismo y hemorragias en embriones de pollo de 14 días de edad.