Liane Hüther, Julia Hartwiger, Caroline Drong, Ulrich Meyer y Sven Dänicke
Determinación simultánea de triptófano, quinurenina y niacina en suero de vacas lecheras periparturientas mediante cromatografía líquida de alto rendimiento con detección por matriz de diodos
El triptófano es un aminoácido esencial y sustrato para importantes vías bioquímicas, por ejemplo, la generación del neurotransmisor serotonina o la construcción de quinurenina y nicotinamida a través de la vía de la quinurenina, que puede ser inducida por la enzima triptófano 2,3-dioxigenasa (TDO) a través de hormonas glucocorticoides o por la indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) después de la activación inmunitaria. Como la relación quinurenina/triptófano se considera un indicador de un sistema inmunitario activado, desarrollamos un método analítico para la determinación simultánea de quinurenina, triptófano y nicotinamida en suero mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y evaluamos su idoneidad como marcadores inflamatorios en vacas lecheras. Los parámetros de validación han demostrado que el método HPLC cumple con los requisitos para el análisis de rutina de triptófano y sus metabolitos quinurenina y nicotinamida en suero con alta linealidad dentro de los respectivos rangos de trabajo y límites de cuantificación de 0,41 µmol L-1 para nicotinamida, 0,43 µmol L-1 para quinurenina y 3,40 µmol L-1 para triptófano. Las variaciones intradía e interdía fueron 2,3 y 3,6% (nicotinamida), 3,1 y 6,3% (quinurenina) y 1,9 y 5,2% (triptófano), respectivamente. La degradación de triptófano a través de la vía de la quinurenina se investigó en 10 vacas lecheras periparturientas de dos grupos dietéticos durante el período de transición. El curso de las concentraciones de triptófano en el suero de la vaca alrededor del parto fue similar al encontrado en mujeres embarazadas con una disminución hasta el nacimiento, seguida de concentraciones de triptófano posparto aumentadas y normalizadas. Sin embargo, en nuestro estudio no se pudo confirmar el aumento de las concentraciones de quinurenina ni una inclinación simultánea de la relación quinurenina/triptófano durante la gestación, salvo un pico de la relación quinurenina/triptófano en el parto, que podría deberse a la activación inducida por la hormona del estrés de la TDO hepática y la IDO extrahepática. Serían útiles mediciones adicionales de interferón-γ y glucocorticoides como inductores putativos de la TDO y la IDO para verificar la idoneidad de la relación quinurenina/triptófano como marcador inmunológico en los bovinos.